Western Blot 实验原理
WB 是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。
Western Blot 分类
根据显色方法主要有以下几种:
放射自显影
底物化学发光 ECL
底物荧光 ECF
底物 DAB 呈色
现在常用的有底物化学发光 ECL 和底物 DAB 呈色,体同水平和实验条件的是用第一种方法,目前发表文章通常是用底物化学发光 ECL。只要买现成的试剂盒就行, 操作也比较简单,原理如下(二抗用 HRP 标记):反应底物为过氧化物 + 鲁米诺,如遇到 HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带。